Repositorio Institucional FLENIEl repositorio digital DSpace captura, almacena, indexa, preserva y distribuye materiales de investigación en formato digital.http://repositorio.fleni.org.ar:80802024-03-28T13:36:54Z2024-03-28T13:36:54ZEstudio de los microARNs involucrados en la diferenciación cardíaca a partir de células pluripotentes humanasGarate, Ximenahttps://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/10522024-03-26T15:01:32Z2018-01-01T00:00:00ZEstudio de los microARNs involucrados en la diferenciación cardíaca a partir de células pluripotentes humanas
Garate, Ximena
Los microARNs son reguladores post-transcripcionales de la expresión génica que participanen la regulación de distintos procesos celulares como por ejemplo en el desarrollo embrionario. En el presente trabajo estudiamos el perfil de expresión de los microARNs durante la diferenciacióna mesodermo temprano y al linaje cardíaco mediante secuenciación masiva de los ARNpequeños. A partir de estos resultados determinamos que hay aproximadamente 700 micro- ARNs que se expresan diferencialmente en las células pluripotentes humanas, un progenitortemprano de mesodermo y cardiomiocitos. A su vez, analizamos la presencia de variantes demicroARNs llamados isomiRs y determinamos la abundancia de las distintas isoformas en lasdistintas poblaciones celulares. A partir del análisis in silico de los genes target determinamosque estas isoformas amplían el repertorio de genes regulados por el microARN canónico, locual sugiere un rol funcional de los isomiRs durante el proceso de diferenciación celular. Porotro lado, analizamos el miRNoma de cada una de las tres poblaciones celulares en base a lasfamilias y clusters de microARNs e identificamos que los microARNs de dichos grupos compartenun perfil de expresión y colaboran entre sí en la regulación de procesos relacionados conel desarrollo embrionario. Además, establecimos el miRNoma de los cardiomiocitos mediantela comparación de los microARNs que se expresan en otros tipos celulares. Finalmente, estudiamosel cluster C19MC, up-regulado en las células pluripotentes, y analizamos de manerain silico y experimental los genes target de dicho cluster. De esta manera, determinamos queel C19MC participa en la regulación del ciclo celular y de distintos procesos de diferenciaciónen el desarrollo embrionario. Por último, estudiamos el miR-205 en la diferenciación a mesodermoe identificamos que su sobreexpresión aumenta al doble el porcentaje del progenitortemprano de mesodermo. Los microARNs ejercen su función formando complejas redes deregulación, lo cual requiere de un análisis más global para poder entender mejor el rol queestos pequeños ARN tienen en las células. Nuestros resultados expanden el conocimiento delos microARNs en relación con el desarrollo cardíaco.
2018-01-01T00:00:00ZEstudio de la participación de la citoquina LIF en el proceso de diferenciación de células madre embrionarias humanas a cardiomiocitos (Registro nro. 48388)Blüguermann, Carolinahttps://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/10512024-03-26T13:03:47Z2015-01-01T00:00:00ZEstudio de la participación de la citoquina LIF en el proceso de diferenciación de células madre embrionarias humanas a cardiomiocitos (Registro nro. 48388)
Blüguermann, Carolina
Las células madre embrionarias humanas (CMEh) se caracterizan por sucapacidad para auto-renovarse, sin perder sus propiedades, casi ilimitadamente.<br/>Una de las principales propiedades de estas células es la pluripotencia, es decir lacapacidad para diferenciarse y dar origen a las tres capas germinales:ectodermo, mesodermo y endodermo. Debido a su capacidad de autorenovacióny a su naturaleza pluripotente las CMEh representan un modeloexperimental único para numerosas áreas de investigación en biología ymedicina.<br/>Estudios recientes realizados para dilucidar los mecanismos que dirigen ladiferenciación de CMEh a cardiomiocitos in vitro, han recapitulado muchos de losprocesos que ocurren in vivo durante el desarrollo cardíaco temprano.<br/>Numerosos trabajos han demostrado que el factor inhibitorio de leucemia<br/>(LIF por su nombre en inglés) puede promover la proliferación o inducir ladiferenciación celular de manera específica, dependiendo del tipo celular oestadío del desarrollo en el que actué. No obstante, poco se sabe acerca de larelevancia biológica de esta citoquina durante el proceso de diferenciacióncardíaca humana.<br/>El objetivo principal de nuestro proyecto de investigación consistió enestudiar el rol de LIF durante la generación y el mantenimiento de cardiomiocitos apartir de CMEh. Para ello, en primera instancia, desarrollamos un nuevo protocolode diferenciación de CMEh a cardiomiocitos, que incluye el uso de un medio decomposición definida y el agregado secuencial de factores específicos quedirigen la diferenciación hacia mesodermo cardíaco. A continuación, evaluamosel efecto del agregado de LIF en diferentes etapas de la diferenciación cardiaca.<br/>Nuestros resultados nos permiten postular que la presencia de LIF a lo largode la diferenciación cardíaca ejerce un efecto citoprotector que estaría asociadoa una diminución de los niveles de apoptosis.<br/>En una segunda etapa logramos generar en nuestro laboratorio una líneade células pluripotentes inducidas (CMPIs) a partir de la reprogramación defibroblastos dérmicos y evaluamos su rendimiento al ser sometidas al protocolo dediferenciación cardíaca. Las CMPIs presentan expresión génica, proteica ymodificaciones epigenéticas muy similares a las CMEh. Estas características lasequiparan a las CMEh, y por ende son vistas como substitutos accesibles.<br/>Palabras clave: Células madre embrionarias humanas, mesodermo, diferenciacióncardíaca, LIF, gp130/STAT3, células madre pluripotentes inducidas.
2015-01-01T00:00:00ZEstablecimiento y estudio in vitro de células madre/progenitoras tumorales derivadas de gliomas de alto grado como fuente renovable para desarrollos terapéuticos (Registro nro. 48054)Videla Richardson, Guillermo Agustínhttps://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/10502024-03-26T12:31:21Z2014-01-01T00:00:00ZEstablecimiento y estudio in vitro de células madre/progenitoras tumorales derivadas de gliomas de alto grado como fuente renovable para desarrollos terapéuticos (Registro nro. 48054)
Videla Richardson, Guillermo Agustín
Los gliomas de alto grado son los tumores cerebrales primarios másfrecuentes y son altamente agresivos e invasivos. Éstos parecen exhibir unaorganización jerárquica y se ha postulado que su generación ocurre a partir decélulas madre tumorales (CMT), las cuales corresponderían a una subpoblaciónminoritaria capaz de generar y propagar tumores al ser inyectadas en ratonesinmunodeficientes. De esta forma, el aislamiento y la caracterización de célulastumorales derivadas de pacientes con fenotipo de células madre o progenitoraspermite contar con un valioso modelo de estudio para comprender en mayorprofundidad la biología de los gliomas. En el presente trabajo logramos establecer con éxito nueve líneas decélulas madre/progenitoras tumorales (CMPT) a partir de biopsias de gliomas dealto grado. Éstas fueron capaces de generar tumores luego de ser inyectadas enel sistema nervioso central en ratones inmunodeficientes y presentaron lasmismas alteraciones genéticas que se encontraron en los tumores parentales. Además, todas ellas fueron positivas para los marcadores de CMT: Nestina, Vimentina, CD44 y Sox2. Sin embargo, el grado de expresión de CD133 resultóser variable en todas las líneas analizadas. A pesar de las similitudes entre las CMPT y las células madre neurales, esconcebible pensar que pueden existir diferencias en sus respectivos potencialesde diferenciación. Para responder este interrogante hemos sometido a estaslíneas celulares a diversos protocolos de diferenciación basados principalmente enel agregado de BMP4 recombinante humano y en la deprivación de factores decrecimiento. Luego de analizar la expresión de distintos marcadores de diferenciación y de evaluar cambios en la morfología celular, determinamos queestas líneas de CMPT poseen un grado variable de multipotencia, en donde cadauna de ellas presenta un grado de compromiso particular hacia los linajesastroglial y neuronal. Además, pudimos observar que la adición de BMP4recombinante redujo marcadamente la tasa de proliferación de todas las líneascelulares estudiadas. Por último, hemos determinado los niveles de expresión del ARNm de distintos ligandos y receptores involucrados en la señalizacióndependiente de BMPs en seis líneas de CMPT, encontrando en ellas ciertospatrones de expresión característicos. Dado que las CMT probablemente dependan de determinadas señales delmicroambiente tumoral para mantener su identidad, un tratamiento efectivo podríabasarse en el bloqueo de mediadores generados en el nicho perivascular. Por estemotivo y dado el gran potencial de este modelo experimental para el testeo dedrogas, decidimos estudiar los niveles de expresión de los ARNm de loscomponentes del eje endotelinérgico en diferentes líneas de CMPT. Pudimosobservar que todas las líneas celulares analizadas mostraron una expresiónelevada de los transcriptos del receptor ETRB, mientras que el grado de expresiónde los componentes restantes del sistema fue dependiente de cada línea celular. Más aún, en dos de cuatro líneas analizadas, el agregado de endotelinasrecombinantes produjo una disminución significativa de los niveles de apoptosisgenerados en condiciones de deprivación de factores de crecimiento y nutrientes. Dada la variabilidad observada en las respuestas celulares a diferentestratamientos en las distintas líneas de CMPT, este trabajo pone de menifiesto larelevancia de contar con un modelo in vitro basado en cultivos derivados degliomas que permita contribuir al desarrollo de terapias personalizadas.
2014-01-01T00:00:00ZEspectroscopia de hidrógeno por resonancia magnética en resonadores clínicos y químicos de alto campo. Estudio de caracterización y seguimiento de tumores cerebrales (Registro nro. 47906)Calvar, Jorge Andréshttps://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/10492024-03-26T12:34:07Z2013-01-01T00:00:00ZEspectroscopia de hidrógeno por resonancia magnética en resonadores clínicos y químicos de alto campo. Estudio de caracterización y seguimiento de tumores cerebrales (Registro nro. 47906)
Calvar, Jorge Andrés
La espectroscopia por resonancia magnética (ERM) es una técnica que utiliza laspropiedades magnéticas de los núcleos y moléculas para estudiar estructuras químicas. Una de sus aplicaciones es brindar información metabolómica de tejidos y soluciones. En particular, la ERM clínica permite analizar el metabolismo de los tejidos “in-vivo”,sin interferir con los procesos bioquímicos de los mismos. En este trabajo de tesis, seanalizó la utilidad de la ERM de alto campo en la clasificación y caracterización detumores gliales cerebrales y el valor de la ERM clínica en el análisis de la evolución delos tumores gliales. Siendo la ERM clínica una técnica de adquisición de espectros muy dependiente de laubicación, tamaño de la lesión y la homogeneidad de campo, la primera parte delestudio consistió en analizar distintos métodos de cuantificación de espectros clínicos entumores cerebrales, teniendo en cuenta estas variables y el tiempo de adquisición. Esteanálisis permitió establecer que para el análisis cuantitativo, un método paramétrico conuna base de metabolitos individuales es más fiable y estable que uno con una basemodelada con Lorentzianas-Gaussianas puras. Además, se estimó el tiempo mínimonecesario de adquisición de un espectro clínico que se quiera cuantificar a partir delespectro sin cancelación del agua. En el caso de una clasificación cualitativa se vio queexiste un número fijo de adquisiciones a partir del cual el espectro no cambiasignificativamente. Siendo hoy la ERM de alto campo con HR-MAS (High Resoution Magic Angle Spinning) una técnica muy utilizada en el estudio metabólico de tejidos, en particular detumores, se analizó la posibilidad de caracterizar tumores gliales con un equipo de altocampo sin la facilidad de HR-MAS. Aquí, a través de una técnica de preparaciónsencilla y repetitiva, se consiguió adquirir espectros de muy buena calidad y obtenerpatrones de espectros que clasifican los tumores, tanto por su anatomía patológica comopor su genética, los dos métodos de referencia en la clasificación tumoral actual. Enparticular con el gen IDH1, un nuevo e importante marcador en tumores glialesasociado con la sobrevida de los pacientes, se identificó una clara relación cualitativa entre metabolitos. Se detectó además la presencia de 2-hidroxiglutarato (2HG) en losespectros, producto de la mutación IDH1. Las conclusiones de este trabajo con ERM dealto campo se utilizaron en un análisis retrospectivo con espectros clínicos de bajocampo. Conocida la limitación de la ERM clínica en la clasificación de tumores cerebrales, seanalizó su utilidad en el seguimiento de tumores gliales de distintos niveles deagresividad. Del análisis no fue posible establecer por ERM un patrón decomportamiento definido de los tumores menos agresivos. En particular y deconsiderable importancia, la ERM no permite identificar claramente cuando un tumorva a malignizar y progresar. Sin embargo, sí permite definir cuando el tumor respondeal tratamiento al cambiar el patrón del espectro a menos agresivo o mantenerse estable. Finalmente, se analizaron los cambios necesarios en la planificación y adquisición parahacer reproducibles y comparables los espectros en estudios clínicos longitudinalescomo los de tumores cerebrales.
2013-01-01T00:00:00Z