https://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/617 2026-04-06T07:53:30Z 2026-04-06T07:53:30Z Isaja, Luciana https://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/1271 2024-11-28T13:29:55Z 2024-04-30T00:00:00Z

Estudio de la mutación PSEN1 (p.T119I), asociada a la Enfermedad de Alzheimer familiar, utilizando técnicas de edición genética y células madre pluripotentes inducidas humanas Isaja, Luciana La enfermedad de Alzheimer (EA) es una patología neurodegenerativa de gran relevancia en la actualidad, debido a su creciente prevalencia y su impacto socioeconómico. La EA está caracterizada por la degeneración progresiva de las células nerviosas, muchas veces de forma concurrente con la aparición de placas de beta-amiloide (Aβ) y ovillos neurofibrilares en el cerebro (ONF). A medida que la población envejece, la prevalencia de la EA continúa en aumento, lo que subraya la urgente necesidad de enfoques innovadores en la investigación y terapia de esta enfermedad neurodegenerativa. La EA posee dos presentaciones: La EA esporádica (EAe) y la familiar (EAf). Esta última se caracteriza por la presencia de mutaciones genéticas específicas que se transmiten de generación en generación dentro de una familia. Estas mutaciones suelen estar alojadas en genes del procesamiento de la proteína precursora amiloide que genera los depósitos de amiloide; APP, PSEN1 y PSEN2. A diferencia de la forma esporádica de la EA, que suele desarrollarse en la edad avanzada, la EA hereditaria puede manifestarse en personas de entre 30 y 50 años. Los síntomas iniciales y la progresión de la enfermedad varían, pero en general, esta forma hereditaria suele tener un inicio más temprano y un curso más rápido, con un deterioro cognitivo más pronunciado. En ese sentido, las células madre pluripotentes inducidas humanas (CMPih) juegan un rol clave en el desarrollo de modelos de neurodegeneración que complementen los ya existentes por su potencialidad de generar modelos derivados de pacientes. Las CMPih son reprogramadas a partir de células adultas mediante la introducción de factores de transcripción específicos y, al ser obtenidas directamente del paciente a estudiar, mantienen casi intacto el contexto genético del mismo. Además, estas células poseen dos características fundamentales: la pluripotencia y la capacidad de autorrenovación. La pluripotencia se refiere a su capacidad para diferenciarse en una amplia gama de tipos celulares. Por otro lado, las CMPih pueden autorrenovarse indefinidamente en el laboratorio, lo que garantiza una fuente constante de células para investigaciones y aplicaciones terapéuticas. Recientemente, en Fleni se reportó una mutación novedosa en el gen de PSEN1 (c. C356T p. T119I) en un paciente con EA de origen temprano. Aún no existe información acerca del rol de esta mutación en la progresión del proceso neurodegenerativo. Nuestra hipótesis de trabajo es que la mutación en sí es causal de la EAf en esta familia. En este trabajo nos propusimos generar modelos para estudiar en profundidad el perfil patogénico causado por esta mutación utilizando CMPih. Para ello, en una primera instancia generamos mediante edición génica utilizando la tecnología CRISPR/Cas9 células HEK293T PSEN1 Knock-Out (KO). Sobre estas células realizamos luego co-transfecciones transitorias con plásmidos de expresión que codifican para APP wild-type (WT) y PSEN1 WT o mutantes (A246E y T119I) y cuantificamos mediante ensayos de ELISA específicos los niveles de Aβ40 y Aβ42 intracelulares. Este experimento dio como resultado que la mutación PSEN1 p.T119I presentó un fenotipo intermedio (menor aumento de la relación Aβ42/Aβ40) al compararlo con una mutación previamente reportada y validada (PSEN1 p.A246E). Luego generamos una línea de CMPih a partir de la reprogramación de fibroblastos dérmicos (FD) de un paciente portador de la mutación PSEN1 c. C357T p. T119I. Con este propósito, primero transducimos los FD del paciente con el vector lentiviral STEMCCA que codifica para los factores de reprogramación de Yamanaka (OCT-4, KLF4, SOX2 y c-MYC) y obtuvimos 3 clones, denominados FFAD1.1c1, FFAD1.2c4 y FFAD1.2c8, los cuales fueron posteriormente validados. Se estudiaron las siguientes características típicas de CMPih: formación de colonias multicelulares compactas con una alta relación núcleo/citoplasma y bordes de colonias marcados, alta actividad de Fosfatasa Alcalina (AP), expresión de marcadores asociados a la troncalidad y la pluripotencia, es decir la capacidad de diferenciarse a tipos celulares de las 3 capas embrionarias (ectodermo, mesodermo y endodermo). Corroboramos además el silenciamiento del casete de expresión STEMCCA, y que se conserve el cariotipo parental de los FD. Además, mediante estudios de filiación por análisis de microsatélites, demostramos que las CMPih reprogramadas y los FD parentales tenían el mismo perfil genético. Una vez seleccionado el clon para seguir trabajando, el FFAD1.2c4, renombrado FFAD1, a partir de ahora la línea de CMPih FFAD1, comenzamos a establecer modelos neuronales en 2 y 3 dimensiones para el estudio de la EA. A partir de este punto, además, se adicionaron 2 como control dos líneas de CMPih, OUWi003-A y UOWi002-A, las cuales fueron generadas desde FD de un paciente con EA portador de la mutación PSEN1 p.A246E y un pariente cercano no portador de la variante y sin EA. Utilizando estas tres líneas se generaron 2 modelos neuronales en 2 dimensiones, uno de neuronas genéricas inmaduras y otro de neuronas corticales, los cuales fueron validados por inmunofluorescencia y RT-qPCR de marcadores neuronales (PAX6, TUJ1, TBR1, TBR2, entre otros). Para facilitar la observación de las placas amiloides, establecimos además un modelo neural en 3 dimensiones (también conocido como organoides cerebrales) el cual fue validado por inmunofluorescencia de marcadores neurales. Luego, cuantificamos los niveles de los péptidos Aβ40 y Aβ42 y Tau fosforilado [pT231] por ELISA en precipitados y sobrenadantes neuronales. Observamos que la línea FFAD1 exhibió un incremento estadísticamente significativo en los niveles de p-Tau [T231] en comparación con las neuronas generadas a partir de la línea OUWi002-A (PSEN1 WT). También, evaluamos los depósitos de Aβ42 y P-tau [pT231] sobre cortes histológicos de los organoides cerebrales y medimos los niveles de Aβ42 y Tau fosforilado [pT231] por ELISA. Los cortes histológicos revelaron que los organoides cerebrales derivados de CMPih de ambas mutaciones en PSEN 1 (p.T119I y p. A246E) mostraron depósitos de placas de Aβ de forma generalizada como así también una disminución en los niveles de péptidos de Aβ42 en los sobrenadantes de los organoides derivados de las líneas de CMPih OUWi003-A (PSEN1 A246E) y FFAD1 (PSEN1 T119I) con respecto a los organoides derivados de la línea control OUWi002-A (PSEN1 WT) y un aumento en la fosforilación en Tau para ambas líneas portadoras de variantes de EA. Por último, realizamos un RNA-seq para encontrar los ARNm diferencialmente expresados en neuronas corticales de la línea de CMPih FFAD1 (PSEN1 T119I) en comparación con las de la línea PSEN1 WT (UOW002i.A). Se analizó el transcriptoma y se identificaron 85 genes diferencialmente expresados, con 34 regulados negativamente y 51 positivamente. Un análisis de ontología génica reveló un enriquecimiento en genes asociados al equilibrio homeostático celular, la membrana plasmática y funciones moleculares como el transporte de sustancias y la homeostasis del hierro. Se seleccionaron 13 genes para validar los resultados mediante RT-qPCR, confirmando las regulaciones observadas en el análisis por RNA-Seq. Al incluir la línea UOW003i-A (PSEN1 A246E), se detectaron ciertos genes (ACP5, NOS3, PROKR2, GPD1, TRPC6, THSD1 y TUBA4A) que compartían un modo de regulación similar con la línea FFAD1, por lo que podrían estar involucrados en mecanismos moleculares comunes asociados a la EA, convirtiéndolos en blancos terapéuticos potencialmente prometedores. En conclusión, los hallazgos de este trabajo respaldan la hipótesis de que la variante PSEN1 (c. C356T p. T119I) posee un rol patogénico en la Enfermedad de Alzheimer de herencia autosómica dominante.

2024-04-30T00:00:00Z Mezmezian, Mónica Beatriz https://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/1121 2024-06-03T13:16:30Z 2018-01-01T00:00:00Z

Propuesta de una clasificación integral de los gliomas difusos del adulto basada en las alteraciones moleculares. Análisis molecular, histopatológico, inmunohistoquímico e imagenológico de los gliomas difusos de alto y bajo grado en una población adulta diagnosticada y tratada en un Centro de referencia de neuropatología de la Ciudad de Buenos Aires. Mezmezian, Mónica Beatriz Introducción: La clasificación de gliomas difusos del adulto se basó durante años en el fenotipo celular presentando una alta discrepancia interobservador. La clasificación OMS 2016 incorporó las alteraciones moleculares para subdividir estos tumores por su implicancia pronóstica. Sin embargo, continúa utilizando los parámetros histopatológicos y las designaciones históricas. Objetivos: Identificar subtipos moleculares de gliomas difusos del adulto y determinar patrones imagenológicos, histopatológicos y clínicos por grupo molecular, para describir una clasificación integral de los gliomas difusos. Materiales y métodos: Estudio retrospectivo observacional evaluando 196 pacientes de 17 a 87 años con gliomas difusos de alto o bajo grado divididos según marcadores moleculares habituales. Se revisaron preparados histopatológicos, estudios imagenológicos prequirúrgicos e historias clínicas analizando variables relacionadas a las descripciones históricas. Resultados: 48% de los gliomas presentaron mutaciones IDH1/2, 13% mostraron codeleción completa 1p19q. El fenotipo astrocitario franco fue identificado frecuentemente en casos IDH wildtype; el oligo-like, con o sin halo claro perinuclear, en casos IDH mutados; siendo el halo claro más habitual en casos codelecionados. El lóbulo frontal fue el más frecuentemente comprometido, aunque más habitual en los IDH mutados. La mediana de edad fue menor en pacientes con mutación IDH que en casos wildtype, presentando mayor supervivencia global en los mutados. La graduación histológica histórica mostró implicancia en la supervivencia en gliomas IDH mutados y en tumores IDH wildtype grado IV. En casos IDH wildtype histopatologicamente grado II y III, la combinación pérdida 10q/ganancia 7p tuvo mayor implicancia en la supervivencia que el grado. En gliomas IDH wildtype grado IV se comprobó utilidad pronóstica de la metilación promotor MGMT. Conclusiones: Se corroboró la mutación IDH1/2 como el principal marcador diferencial de los gliomas difusos del adulto. La codeleción 1p19q fue un indicador relevante por su necesidad de tratamiento diferencial. La falta de identificación de un fenotipo celular tumoral específico de grupo y la ausencia de los parámetros histopatológicos históricos de oligodendroglioma en casos IDH mutados 1p19q codelecionados o de astrocitoma en casos sin codeleción, demostraron la poca utilidad de dichas denominaciones. Si bien se encontraron parámetros microscópicos, imagenológicos y clínicos frecuentemente observados en ciertos grupos moleculares, estos fueron inespecíficos, no permitiendo precisar la alteración molecular subyacente. Consecuentemente, se propone como clasificación: glioma difuso IDH mutado, con o sin codeleción 1p19q grado II o III y glioblastoma IDH mutado; glioma difuso IDH wildtype con o sin combinación pérdida 10q/ganancia 7p y glioblastoma IDH wildtype con o sin metilación promotor MGMT.

2018-01-01T00:00:00Z Draksler, María Florencia https://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/1099 2024-04-29T13:46:05Z 2019-01-01T00:00:00Z

Funcionamiento social, rendimiento cognitivo y de cognición social en pacientes con lesiones derechas Draksler, María Florencia Introducción: los pacientes con lesiones cerebrales derechas (LDH) se caracterizan por presentar una serie de déficits cognitivos que han sido ampliamente estudiados (Abusamra et al., 2009; Morris, 2010; Njomboro, 2017; Connie A Tompkins, 2012); además de presentar fallas en habilidades pragmáticas del lenguaje (Champagne-Lavau y Joanette, 2009). Sin embargo, no existe consenso sobre fallas en cognición social subyacentes ni sobre cómo interaccionan posibles déficits en cognición social con otras fallas cognitivas, atencionales y ejecutivas. Discriminar la participación de estos aspectos en su funcionamiento real conlleva suma importancia para el abordaje clínico efectivo. Objetivos y métodos: utilizando una muestra intencional de 20 pacientes LHD, el presente estudio analizó la asociación entre: a) el funcionamiento social, b) los déficits ejecutivos y atencionales y c) las dificultades de cognición social. 20 sujetos fueron evaluados con una batería neuropsicológica y reportes familiares Resultados: un análisis jerárquico por grupos arrojó que la conjunción de fallas ejecutivas y bajos desempeños en cognición social fue lo que más se asociaba con bajos rendimientos en funcionamiento social. La flexibilidad y el control inhibitorio correlacionaron con la participación, comunicación, disfunción socioemocional y discurso conversacional. Las pruebas de teoría de la mente y prosodia emocional fueron las que más correlacionaron con el rendimiento cognitivo. Discusión y conclusiones: se discuten las implicancias de los resultados obtenidos para la investigación y la práctica clínica, con eje en la interacción entre funciones ejecutivas y cognición social, y cómo ésta puede asociarse con el funcionamiento social en pacientes LHD.

2019-01-01T00:00:00Z Agost Carreño, María Cecilia https://repositorio.fleni.org.ar/xmlui/handle/123456789/1098 2024-04-29T12:12:07Z 2008-01-01T00:00:00Z

Evaluación del impacto de un programa educativo terapéutico en el desarrollo cognitivo de un grupo de niños con autismo Agost Carreño, María Cecilia El autismo es un trastorno del desarrollo cuya etiología se desconoce y que se define en base a características conductuales y del desarrollo (Lord y Mac Gee, 2001). A lo largo de los últimos años se han descripto muchos métodos de intervención para el abordaje de niños con autismo, pero relativamente pocos se han investigado y validado adecuadamente. Los programas que han mostrado un impacto positivo son aquellos que integran varios abordajes como el Análisis Conductual Aplicado (Lovaas y otros, 1981), las intervenciones basadas en el desarrollo como Floortime (Greenspan y Weider, 1997) y aquellas que apuntan a mejorar la comunicación como PECS (Bondy y Frost, 1994). En este trabajo se analizará la efectividad del programa educativo terapeútico que se lleva a cabo en el CETNA. Se realizará un diseño cuasi experimental, analizando los datos pre y post tratamiento con un intervalo de un año, en un gupo de 11 niños que asisten durante 15 horas semanales. Los resultados mostraron diferencias estadísticamente significativas en 6 áreas del desarrollo evaluadas a través d euna prueba estandarizada.Estos resultados sugieren que el programa del CETNA sería un abordaje efectivo para este tipo de población.

2008-01-01T00:00:00Z